بررسی سلول های گیاهی بشره پیاز

[Almas Parsi]

تعین قطر دید میکروسکوپ

:
وسایل مورد نیاز:لام و میکروسکوپ

ابتدا روی لام یک نقطه روی لام می گذاریم بعد لام را در جایش مگذاریم طوری بیس را تنظیم میکنیم تا نقطه در قسمت تایک قرار گیرد ومماس بران بعد طول ان رایادادشت میکنیم بعد در طرف مقابل برده و طول ان را یاداشت میکنیم بعد نقطه را در جهت عرض قرار داده و عرضها اندازه میگیریم در اخر اختلاف طولها و عرضها پیدا میکنیم

پیاز را در جایی نیمه تاریك گذاشته تا حدود نیم سانتی متر ریشه بدهد سپس سه میلی متر از آن را در ساعت حدود 6 یا 7 عصر جدا كنید زیرا در آن موقع تقسیمات سلولی شدیدتر است سپس قطعات را در محلول تثبیت كننده شامل یك قسمت اسید استیك غلیظ و سه قسمت الكل اتیلیك مطلق بیندازید و24 ساعت صبر كنید می توان چند قطره محلول تثبیت كننده را روی لام حامل نوك ریشه ها بریزید و 10 دقیقه صبر كنید در صورتی كه در این مدت محلول تبخیر شد مجدا محلول تثبیت كننده بیفزایید سپس قطعات را پس از شستشو با آب مقطر در شیشه ساعت قرار دهید.

مخلوطی ازاستو اورسئین و اسید كلریدریك یك نرمال ( به نسبت 10 به 1) روی آنها بریزید. شیشة ساعت ها را روی شعله بگیرید و به مدت چند دقیقه حرارت دهید محلول باید در حد بخار كردن داغ شود اما جوش نیاید سپس محلول را سرد كرده و یكی از برشها را روی آن بگذارید و یك قطره استئو اورسئین تازه روی آن بریزید این برشها را به كمك یك سوزن قطعه قطعه كنید سپس لاملی را روی قطعات حاصله بگذارید یك دستمال كاغذی را چند لا كرده و با فشار انگشت از دو طرف لام و لامل و با واسطه دستمال كاغذی برشها را له كنید تا رنگ اضافی خارج شود سپس مقطع را بررسی كنید.
روش دوم :
ظرف a : یك قسمت اسید استیك گلاسیال + 3 قسمت الكل
ظرف b : اسید كلرید ریك 10 درصد
ظرف c : مخلوطی از a و b به نسبت مساوی
1- نمونه را در ظرف a به مدت 15 دقیقه قرار داده و سپس با آب شستشو می دهیم.
2- نمونه را یك دقیقه در ظرف b قرار می دهیم.
3- سه الی 5 دقیقه در ظرف c قرار می دهیم و سپس با آب شستشو می دهیم.
4- سپس یك قطره كریستال ویوله را بر روی لام حاوی نمونه می ریزیم

مشاهده كروموزومها در پیاز یا گیاهی دیگر

برشی از مریستم ریشه را تهیه كرده و مراحل تهیه لام و رنگ آمیزی را همانند آزمایش تقسیم میتوز انجام داده و زیر میكروسكوپ مشاهده كنید.

- - - به روز رسانی شده - - -

طرزتهيه گسترش خوني:
وسايل کار: دو عدد لام يک بار مصرف تميز- پنبه – الکل- لانست- متانول- رنگ گيمسا
روش کار: ابتدا نوک انگشت را توسط پنبه آغشته به الکل ضد عفوني ميکنيم . بعد توسط يک ضربه لانست نوک انگشت را سوراخ کرده, خون جريان پيدا ميکند
روش لانست زدن:يک قطره خون را(بوسيله لوله هماتوکريت ساده) در يک سانتيمتري انتهاي لام قرار ميدهيم (مطابق شکل) لبه لام ديگر(لام rode) را با زاويه ۳۰ - ۴۵ درجه بر روي قطره خون قرار مي دهيم .لحظه اي بعد خون سراسر روي لبه لام دوم( فصل مشترک دو لام) ا نتشار مي يابد. اکنون لام را با يک فشارملايم و با سرعت يکنواخت در سطح لام اول به سمت جلوحرکت ميدهيم . در پايان گسترش خوني درهواي آزمايشگاه خوب خشک شود سپس خون روي لام را توسط ريختن الکل متانول ثابت ميکنيم.ميگذاريم سطح لام خوب خشک شود.اين لام براي رنگ آميزي آماده است.
رنگ آميزي:
اول روي واقعي لام خوني را مشخص کرده و علامت زده - همان طرف لام که قبلا رويش خون کشيده ايم و با الکل متانول آن را ثابت کرديم.نحوه رنگ آميزي:رنگ گيمسا را به نسبت يک به ده رقيق مي کنيم ( ۱ccرنگ +۹cc آب) و سپس لام را داخل آن قرار مي دهيم .سپس رنگ روي لام را مي شوريم.لام به رنگ آبي متمايل به بنفش مي شود.
نکاتي در مورد لام ها :۱- بايد لامها را تميزوعاري ازچربي انتخاب کرد.
۲- لام (rode) بايد لبه اش صاف باشد.

[

- - - به روز رسانی شده - - -

هدف ازتهيه گسترش خوني:I. شمارش افتراقي گلبولهاي سفيد(DIFF)
II. بررسي مرفولوژي گلبولها

ويژگيهاي يک گسترش خوني:تهيه يک گسترش خوني استاندار واصولي نخستين قدم درتشخيص سلولهاي خوني طبيعي از غير طبيعي وحکم درخصوص آنهاست و يک گسترش خوني نادرست باعث اشکال در تشخيص سلولهاي خوني ميشود.
۱- گسترش خوني دوسوم(۳/۲) سطح لام را اشغال کند-گسترش خوني کوتاه ارزش پائيني دارد-
۲- گسترش خوني ازابتدا وانتهاي لام فاصله داشته باشد.
۳- گسترش خوني مطلوب داراي مناطق ضخيم متوسط ونازک ميباشد.
۴- انتهاي گسترش خوني شعله شمعي باشد - انتهاي گسترش هاي خوني ناصاف، کج و نوک تيز بي ارزش تلقي ميشود-
۵- يک گسترش خوني خوب داراي دو حاشيه دردو سمت لام دارد
تهيه گسترش خوني خوب نيازمند تمرين وممارست است به هرحال براي تهيه گسترش خوني نازک با کم کردن زاويه وبراي آماده کردن لام ضخيم با زياد کردن زاويه به اين هدف نايل ميشويم .