ازمایشگاه سلولی ملکولی

[سوگول]

سام بچه ها یکی میتونه سر فصلای ازمایشگاه سلولی ملکولی رو بگه؟

[سمیه 20]

سرفصل های آزمایشگاه زیست سلولی و مولکولی
1- معرفی و طرز کار با میکروسکوپ ها: میکروسکوپ نوری معمولی - کنتراست دو فاز - زمینه سیاه
2-مورفولوژی انواع سلول ها: چند نمونه تک سلولی - چند نمونه گیاهی - چند نمونه سلول جانوری
3- اندازه گیری ابعاد سلولی و نمونه هایی از محاسبات آماری در این زمینه با استفاده از میکروسکوپ
4- شمارش سلولی: مانند سلول های خون - مخمرها - جانوران محیط های مایع ...
5- مطالعه سلول های زنده: توجه به ضمائم حرکتی مانند مژک، تاژک، حرکت آمیبی، سیکلوز، رنگ آمیزی حیاتی (کلراسیون ویتال)
6- مطالعه سلول های ثابت شده (فیکسه): فیکساسیون سریع (مانند سلول های خونی) - فیکیاسیون - دهیدراتاسیون - قالب گیری (پارافینی) تهیه برش - رنگ آمیزی - مونتاژ
7- جداسازی اجزاء سلولی: هموژن کردن و تهیه سوسپانسیون سلول های منفرد - لیز سلول و تفکیک اجزاء سلولی تا حد امکان
8- بررسی ارگانیت های سلولی با رنگ آمیزی های مختلف: میتوکندری(سبزژانوس) - غشاء سیتوپلاسمی (کلرو نقره) - اسید های نوکلئیک (فولگن - تست براشه) - کلروپلاست ها (رودامین)

[سوگول]

ممنون سمييه جان ميشه شماره سه و هفتو توضيح بدي .اخه اينارو نداشتيم ما.ممنون ميشم

[سمیه 20]

برای اندازه گیری ابعاد در میکروسکوپ نوری از عدسی چشمی خاصی که میکرومتر چشمی یا گراتیکول نام دارد استفاده می شود. روی این عدسی خطی وجود دارد که به تعداد درجات مساوی (معمولا 100 قسمت مساوی) تقسیم شده است که این تقسیمات نمی تواند دارای مقیاس مشخصی باشد زیرا بزرگنمایی میکروسکوپ با استفاده از بزرگنمایی های مختلف عدسی شیئی تغییر می کند.بنابراین قبل از بکاربردن این میکرومتر برای اندازه گیری باید مقیاس و درجات آن را برای بزرگنمایی های مختلف تعیین کرد به این منظور از میکرومتر دیگری به نام لام مدرج میکرومتری یا میکرومتر صفحه ای استفاده می شود.این میکرومتر یک لام شیشه ای است که دربخش میانی آن که با دایره سیاهرنگ مشخص شده یک فاصله یک میلیمتری به 100 قسمت مساوی تقسیم شده است یعنی کوچک ترین تقسیم بندی این میکرومتر برابر با 01/0 میلیمتر یا 10 میکرون است.
پس از قرار دادن گراتیکول در مدخل خود لام میکرومتر دار را روی صفحه میکروسکوپ قرار داده و پس از پیدا کردن بخش مدرج لام با کم کردن نور تصویر را واضح می کنیم، آنگاه با حرکت دادن تدریجی لام میکرومتر دار روی صفحه و یا چرخش عدسی چشمی درجات دو میکرومتر را بر هم منطبق می کنیم به نحوی که صفر هر دو درجه بندی و امتداد درجات آن ها روی هم قرار بگیرد.
در هر یک از بزرگنمایی های عدسی شیئی با شمردن تعدادی از تقسیمات میکرومتر چشمی که بر تقسیمات لام میکرومتردار منطبق است و با در دست داشتن مقیاس تقسیمات لام مدرج، مقیاس درجات میکرومتر چشمی برای آن بزرگنمایی خاص به دست می آید. پس از بدست آوردن مقیاس میکرومتر چشمی برای بزرگنمایی های مختلف میکروسکوپ، لام میکرومتردار را برمی داریم. از این پس می توان کلیه اندازه گیری ها را فقط به کمک میکرومتر چشمی انجام داد.
به عنوان مثال فرض کنید که در بزرگنمایی 10 میکروسکوپ، 43 درجه از تقسیمات میکرومتر چشمی با 50 درجه از تقسیمات لام مدرج مطابق باشد، با توجه به این که طول هر یک از درجات لام مدرج برابر با 01/0 میلیمتر است، مقیاس هر یک از درجات میکرومتر چشمی به صورت زیر تعیین می شود:

[سمیه 20]

تقسیماتی از لام مدرج (بر حسب میکرون) --------------------- تقسیماتی از میکرومتر چشمی
(10 × 50) = 500 --------------------------------------------------------- 43
میکرون 6/11 = ؟ ---------------------------------------------------------- 1
پس اگر نمونه ای در بزرگنمایی 10 میکروسکوپ 5 قسمت از درجات میکرومتر چشمی را بپوشاند طول آن برابر با 58 = 6/11 × 5 میکرون خواهد بود.
مرجع: راهنمای عملی زیست شناسی سلولی و مولکولی تألیف دکتر احمد مجد و دکتر سید محمد علی شریعت زاده

[سمیه 20]

جداسازی اجزاء سلولی:
تهیه اجزاء مختلف یاخته شامل دو مرحله خرد کردن و همگن سازی (هموژناسیون) بافت و سپس جدا کردن یا تفکیک بخش های مختلف اجزاء یاخته ای بر حسب جرم و شکل آن ها توسط دستگاه سانتریفیوژ است. میزان خلوص و سالم بودن اجزاء یاخته ای که بدین سان بدست می آیند، با روش های میکروسکوپی و یا روش های میکرو شیمیایی زیست شیمیایی تعیین می شود.
تمامی مراحل تهیه اجزاء یاخته ای در دماهای پایین (صفر تا 4 درجه سانیگراد) انجام می گیرد، زیرا این اجزاء در دمای اتاق ناپایدارند و سریعاً تخریب می شوند.
عمل جزء جزء کردن یاخته ها مراحلی دارد که نخستین مرحله آن عبارت است از هورمون کردن (همگن سازی) یا از هم گسیختن بافت به طریق مکانیکی در محلول های بافری که حاوی غلظت های مختلف سوکروز هستند. سوسپانسیونی که در نتیجه خرد کردن بافت به دست می آید حاوی مخلوطی از اجزاء یاخته ای و سایر مواد است و بخش عمده آن را یاخته ای خرد نشده، دیواره یاخته ای، قطعات بافت پیوندی و سایر بخش های متفرقه تشکیل می دهند، بهتر آن است که سوسپانسیون حاصل از هوموژن کردن یاخته ها فقط از یاخته های خرد نشده و اندامک های سالم تشکیل شده باشد، برای این منظور با عبور دادن سوسپانسیون از خلال یک یا چند لایه صافی های واجد سوراخ های نسبتاً درشت مثل پشم شیشه آن را صاف کرده و بخش های زاید آن را جدا می سازند.
مرحله بعدی در جداسازی اجزاء سلولی جداسازی و تفکیک اجزاء یا اندامک های به دست آمده با استفاده از نیروی گریز از مرکز (سانتریفوژ) است. برای جداسازی اجزاء یاخته ای معمولاً از دو روش سانتریفوژ مرحله به مرحله و سانتریفوژ در شیب غلظت استفاده می شود.

کتاب راهنمای عملی زیست شناسی سلولی و مولکولی