جداسازي، همسانه سازي و امتزاج ناحيه N-ترمينال ژن ipaD شيگلا ديسانتريه و زيرواحد B سم ريسين

جداسازي، همسانه سازي و امتزاج ناحيه N-ترمينال ژن ipaD شيگلا ديسانتريه و زيرواحد B سم ريسين

نويسندگان: صادق صفائی ، PHD حسين هنری ، سيد جعفر موسوی ، عقيل اسماعيلی ، مهدی غفرانی

نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: تخصصي

چکيده مقاله:

شيگلا ديسانتريه پاتوژن مهمي است كه باعث ايجاد عفونت در روده انسان مي شود. آنتي‌ژنIpaD نقش مهمي در بيماري‌زايي و ايجاد عفونت توسط شيگلا دارد. چالش استفاده از پروتئين IpaD در طراحي واكسن مخاطي، قدرت پايين و عدم انتقال آن به بافتهاي مخاطي روده مي‌باشد. با اتصال ناقل و ادجوانت گياهي RTB به آنتي‌ژن IpaD، مي‌توان به رفع چالش توليد واكسن مخاطي عليه شيگلوزيس پرداخت. اين تحقيق با هدف ساخت يك كاست ژني شامل ناحيهN-‌ترمينال ژنipaD، كه به ژنRTB متصل‌شده‌است به عنوان رويكردي جديد براي توليد واكسن مخاطي عليه شيگلا صورت مي‌گيرد. DNA ژنومي گياه كرچك به روش CTABاستخراج شد. با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، قطعه‌819 نوكلئوتيدي ژن RTB داراي لينكرGPGP، تكثير گرديد. واكنش PCRبراي تكثير ژن ipaD نيز انجام‌گرفت. هر يك از قطعات تكثير‌شده به درون وكتور pGEM-T همسانه‌سازي شدند. به منظور ساخت كاست ژني، ipaD با آنزيم‌هاي XhoI/HindIII از درون وكتور pGEM-ipaD خارج‌گرديد. متعاقب آن، پلاسميد نوتركيب pGEM-RTB تحت برش آنزيمي XhoI/HindIII قرار‌گرفت. طي فرايند الحاق ipaDبه پلاسميد نوتركيب pGEM-RTB براي ساخت كاست ژني RTB-ipaD همسانه‌سازي شد؛ و با استفاده از دستگاه توالي‌ياب، توالي نوكلئوتيدي كاست ژني شناسايي گرديد. پس از تاييد كلونينگ ژنهاي RTB و ناحيه N-ترمينال ژن ipaD، كاست ژني ساخته شده با عمل PCR،Nested-PCR ، برش آنزيمي و تعيين توالي مورد تائيد قرار‌گرفت. بر اساس آخرين اطلاعات، اين اولين گزارش از طراحي و ساخت كاست ژني RTB-ipaD مي باشد، كه مي‌تواند براي توسعه توليد واكسن مخاطي عليه شيگلوزيس به كار رود. اين تحقيق مسيري راهبردي را براي توليد فيوژن پروتئين و مطالعات ايمنولوژيكي مي‌گشايد.

واژه‌هاي كليدي: ادجوانت، امتزاج، زير‌واحد B توكسين ريسين، شيگلوزيس.،

متن كامل [PDF 673 kb]

چکيده مقاله:
شيگلا ديسانتريه پاتوژن مهمي است كه باعث ايجاد عفونت در روده انسان مي شود. آنتي‌ژنIpaD نقش مهمي در بيماري‌زايي و ايجاد عفونت توسط شيگلا دارد. چالش استفاده از پروتئين IpaD در طراحي واكسن مخاطي، قدرت پايين و عدم انتقال آن به بافتهاي مخاطي روده مي‌باشد. با اتصال ناقل و ادجوانت گياهي RTB به آنتي‌ژن IpaD، مي‌توان به رفع چالش توليد واكسن مخاطي عليه شيگلوزيس پرداخت. اين تحقيق با هدف ساخت يك كاست ژني شامل ناحيهN-‌ترمينال ژنipaD، كه به ژنRTB متصل‌شده‌است به عنوان رويكردي جديد براي توليد واكسن مخاطي عليه شيگلا صورت مي‌گيرد. DNA ژنومي گياه كرچك به روش CTABاستخراج شد. با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، قطعه‌819 نوكلئوتيدي ژن RTB داراي لينكرGPGP، تكثير گرديد. واكنش PCRبراي تكثير ژن ipaD نيز انجام‌گرفت. هر يك از قطعات تكثير‌شده به درون وكتور pGEM-T همسانه‌سازي شدند. به منظور ساخت كاست ژني، ipaD با آنزيم‌هاي XhoI/HindIII از درون وكتور pGEM-ipaD خارج‌گرديد. متعاقب آن، پلاسميد نوتركيب pGEM-RTB تحت برش آنزيمي XhoI/HindIII قرار‌گرفت. طي فرايند الحاق ipaDبه پلاسميد نوتركيب pGEM-RTB براي ساخت كاست ژني RTB-ipaD همسانه‌سازي شد؛ و با استفاده از دستگاه توالي‌ياب، توالي نوكلئوتيدي كاست ژني شناسايي گرديد. پس از تاييد كلونينگ ژنهاي RTB و ناحيه N-ترمينال ژن ipaD، كاست ژني ساخته شده با عمل PCR،Nested-PCR ، برش آنزيمي و تعيين توالي مورد تائيد قرار‌گرفت. بر اساس آخرين اطلاعات، اين اولين گزارش از طراحي و ساخت كاست ژني RTB-ipaD مي باشد، كه مي‌تواند براي توسعه توليد واكسن مخاطي عليه شيگلوزيس به كار رود. اين تحقيق مسيري راهبردي را براي توليد فيوژن پروتئين و مطالعات ايمنولوژيكي مي‌گشايد.

واژه‌هاي كليدي: ادجوانت، امتزاج، زير‌واحد B توكسين ريسين، شيگلوزيس.، متن كامل [PDF 673 kb]