AvAstiN
16th September 2010, 02:12 PM
http://www.sheep101.info/Images/agarplates.jpg
1. آب مورد استفاده در محيط سازي بايد داراي كيفيت مناسب باشد يعني فاقد مواد مهار كنندة رشد ميكروبي (يونهاي سمي مثل مس) يا تأثيرگذار در رشد ميكروبي باشد. آب شير نامناسب است چون داراي ناخالصي هاي ذاتي(منيزيم، كلسيم، كلر، فلور) است. 2. آب خوب و تازه را با تقطير يا ديونيزاسيون تهيه كنيد. براي نگهداري آبمقطر از ظرفي استفاده كنيد كه از مواد خنثي (شيشة خنثي، پلي اتيلن) تهيه شده باشد.
3. ضريب هدايت آب بايد كمتر از 15 µsباشد.
4. PHآب معمولاً كنترل نمي شود مگر آنكه در PH محيط هاي كشت تهيه شده، مشكلي بوجود آيد.
5. در تهية محيط كشت طبق دستورالعمل شركت سازنده كه بر روي قوطي نصب شده، مقدار مناسبي از پودر را با دقت وزن كنيد.
6. ظرف محيط كشت را دور از كوران هوا و رطوبت باز كنيد.
7. از استنشاق پودرها بخصوص آنهايي كه داراي مواد سمي هستند و تماس طولاني مدت آنها با پوست اجتناب كنيد.
8. پودر را به سرعت، به دقت و بدون ايجاد توده اي از غبار وزن كنيد. هنگام كار از ماسك مناسب استفاده كنيد. 9. درب قوطي محيط كشت را هر چه سريعتر ببنديد.
10. نصف حجم آب مورد نياز را داخل ظرف بريزيد، سپس مقدار توزين شدة محيط كشت را به آن اضافه نماييد و براي چند دقيقه به تندي تكان دهيد.
11. باقيماندة آب را به ديواره هاي ظرف بريزيد تا ذرات محيط كشت چسبيده به ديوار، وارد محلول شوند. اين مرحله بسيار مهم است چون ممكن است پودر خشك محيط كشت در بالاي سطح آب در اتوكلاو استريل نشود و منبع آلودگي بعدي گردد.
12. آب را در ظرف مناسب، با حجم 2 تا 3 برابر حجم نهايي محيط كشت بريزيد تا بتوان آنرا بخوبي تكان داد و مخلوط نمود.
13. محيط هاي كشت فاقد آگار معمولا به راحتي در آب حل ميشوند.
14. محيط هاي كشت حاوي آگار را بايد قبل از حرارت دادن، چند دقيقه با آب مخلوط نمود، سپس حرارت داد تا آگار قبل از اتوكلاو كردن كاملاً حل شود. محيط هاي كشت را بجوشانيد بدون آنكه بسوزند.
15. محيط هاي كشتي كه نبايد اتوكلاو شوند بعد از حل شدن آگار، براي توزيع در ظروف نهايي آماده خواهند بود اما اكثر محيطهاي كشت به استريليزاسيون نهايي دارند.
16. استريليزاسيون با حرارت مرطوب: در اتوكلاو به مدت 15 دقيقه و در دمايC ۫121 انجام مي گيرد . توصيه مي شود مقادير زياد محيط كشت را در حجم هاي كوچكترتقسيم نماييد.
17. استريليزاسيون با صافي غشايي استريليزاسيون o تحت شرايط خلأ يا افزايش فشار انجام مي گيرد. o براي استريليزاسيون مواد و تركيبات حساس به حرارت بكار ميرود. o از غشاءها و صافي هاي با قطر منفذ µm 22/0 يا 45/0 استفاده كنيد. o اين فيلترها قبل از استفاده بايد در اتوكلاو استريل شوند.
18. اگر محيط هاي كشت دهيدراته بطور مناسب تهيه شوند، نيازي به تنظيم PHتوسط مصرف كننده نيست.
19. PH نهايي محصول استريل شده را مي توان روي پليت يا بطري اندازه گيري كرد، اما بايد آن را پس از سنجش PH دور ريخت.
20. پس از استريل و خنك شدن محيط كشت تا دماي C ۫ 25، مقدار PH را در حد مورد نظر( 2/0 ±) تنظيم كنيد.
21. تنظيم PH معمولاً با استفاده از NaOH40 گرم در ليتر و يا با استفاده از HCl 5/36 گرم در ليتر انجام مي شود. 22. بعد از استريليزاسيون و پس از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50 رسيد، با رعايت شرايط آسپتيك آنرا در ظروف نهايي استريل توزيع كنيد.
23. بايد مكمل هاي حساس به حرارت را بعد از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50 رسيد، در شرايط آسپتيك به آن اضافه نمود.
24. دماي مكمل (ساپلمنت) استريل نيز بايد قبل از افزودن به محيط كشت به دماي اتاق برسد.
25. جهت كنترل استريل بودن پليتها، 5-3% آنها را براي 24 ساعت انكوبه كنيد. در طول انكوباسيون ممكن است رطوبت محيط آگار از بين برود. از دست دادن بيش از 15% محتويات آب، ممكن است روي رشد ميكروارگانيسم اثر نامطلوب بگذارد
26. محيط هاي كشت آماده شده را سريعاً مصرف نموده يا تحت شرايطي كه محتوياتشان تغيير نكند يعني دور از نور و در دماي يخچال ذخيره نماييد.
27. در صورت بسته بندي پليتها در كيسه هاي پلاستيكي، زمان نگهداري آنها افزايش مي يابد. براي جلوگيري از تجمع رطوبت در پليتها، آنها را قبل از قرار دادن در كيسه، خنك كنيد.
28. براي تلقيح سطحي محيط كشت جامد، سطح پليت مربوطه را خشك كنيد. براي اين كار، درپوش پليت را برداشته و هر دو را بطور واژگون در داخل انكوباتور كه در دماي C ۫ 50 – 25 تنظيم شده، قرار دهيد تا قطرات آب از سطح محيط كشت ناپديد شود.
منبع (http://foodamir.blogfa.com/)
1. آب مورد استفاده در محيط سازي بايد داراي كيفيت مناسب باشد يعني فاقد مواد مهار كنندة رشد ميكروبي (يونهاي سمي مثل مس) يا تأثيرگذار در رشد ميكروبي باشد. آب شير نامناسب است چون داراي ناخالصي هاي ذاتي(منيزيم، كلسيم، كلر، فلور) است. 2. آب خوب و تازه را با تقطير يا ديونيزاسيون تهيه كنيد. براي نگهداري آبمقطر از ظرفي استفاده كنيد كه از مواد خنثي (شيشة خنثي، پلي اتيلن) تهيه شده باشد.
3. ضريب هدايت آب بايد كمتر از 15 µsباشد.
4. PHآب معمولاً كنترل نمي شود مگر آنكه در PH محيط هاي كشت تهيه شده، مشكلي بوجود آيد.
5. در تهية محيط كشت طبق دستورالعمل شركت سازنده كه بر روي قوطي نصب شده، مقدار مناسبي از پودر را با دقت وزن كنيد.
6. ظرف محيط كشت را دور از كوران هوا و رطوبت باز كنيد.
7. از استنشاق پودرها بخصوص آنهايي كه داراي مواد سمي هستند و تماس طولاني مدت آنها با پوست اجتناب كنيد.
8. پودر را به سرعت، به دقت و بدون ايجاد توده اي از غبار وزن كنيد. هنگام كار از ماسك مناسب استفاده كنيد. 9. درب قوطي محيط كشت را هر چه سريعتر ببنديد.
10. نصف حجم آب مورد نياز را داخل ظرف بريزيد، سپس مقدار توزين شدة محيط كشت را به آن اضافه نماييد و براي چند دقيقه به تندي تكان دهيد.
11. باقيماندة آب را به ديواره هاي ظرف بريزيد تا ذرات محيط كشت چسبيده به ديوار، وارد محلول شوند. اين مرحله بسيار مهم است چون ممكن است پودر خشك محيط كشت در بالاي سطح آب در اتوكلاو استريل نشود و منبع آلودگي بعدي گردد.
12. آب را در ظرف مناسب، با حجم 2 تا 3 برابر حجم نهايي محيط كشت بريزيد تا بتوان آنرا بخوبي تكان داد و مخلوط نمود.
13. محيط هاي كشت فاقد آگار معمولا به راحتي در آب حل ميشوند.
14. محيط هاي كشت حاوي آگار را بايد قبل از حرارت دادن، چند دقيقه با آب مخلوط نمود، سپس حرارت داد تا آگار قبل از اتوكلاو كردن كاملاً حل شود. محيط هاي كشت را بجوشانيد بدون آنكه بسوزند.
15. محيط هاي كشتي كه نبايد اتوكلاو شوند بعد از حل شدن آگار، براي توزيع در ظروف نهايي آماده خواهند بود اما اكثر محيطهاي كشت به استريليزاسيون نهايي دارند.
16. استريليزاسيون با حرارت مرطوب: در اتوكلاو به مدت 15 دقيقه و در دمايC ۫121 انجام مي گيرد . توصيه مي شود مقادير زياد محيط كشت را در حجم هاي كوچكترتقسيم نماييد.
17. استريليزاسيون با صافي غشايي استريليزاسيون o تحت شرايط خلأ يا افزايش فشار انجام مي گيرد. o براي استريليزاسيون مواد و تركيبات حساس به حرارت بكار ميرود. o از غشاءها و صافي هاي با قطر منفذ µm 22/0 يا 45/0 استفاده كنيد. o اين فيلترها قبل از استفاده بايد در اتوكلاو استريل شوند.
18. اگر محيط هاي كشت دهيدراته بطور مناسب تهيه شوند، نيازي به تنظيم PHتوسط مصرف كننده نيست.
19. PH نهايي محصول استريل شده را مي توان روي پليت يا بطري اندازه گيري كرد، اما بايد آن را پس از سنجش PH دور ريخت.
20. پس از استريل و خنك شدن محيط كشت تا دماي C ۫ 25، مقدار PH را در حد مورد نظر( 2/0 ±) تنظيم كنيد.
21. تنظيم PH معمولاً با استفاده از NaOH40 گرم در ليتر و يا با استفاده از HCl 5/36 گرم در ليتر انجام مي شود. 22. بعد از استريليزاسيون و پس از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50 رسيد، با رعايت شرايط آسپتيك آنرا در ظروف نهايي استريل توزيع كنيد.
23. بايد مكمل هاي حساس به حرارت را بعد از آنكه دماي محيط كشت به حدود C ۫ 50 رسيد، در شرايط آسپتيك به آن اضافه نمود.
24. دماي مكمل (ساپلمنت) استريل نيز بايد قبل از افزودن به محيط كشت به دماي اتاق برسد.
25. جهت كنترل استريل بودن پليتها، 5-3% آنها را براي 24 ساعت انكوبه كنيد. در طول انكوباسيون ممكن است رطوبت محيط آگار از بين برود. از دست دادن بيش از 15% محتويات آب، ممكن است روي رشد ميكروارگانيسم اثر نامطلوب بگذارد
26. محيط هاي كشت آماده شده را سريعاً مصرف نموده يا تحت شرايطي كه محتوياتشان تغيير نكند يعني دور از نور و در دماي يخچال ذخيره نماييد.
27. در صورت بسته بندي پليتها در كيسه هاي پلاستيكي، زمان نگهداري آنها افزايش مي يابد. براي جلوگيري از تجمع رطوبت در پليتها، آنها را قبل از قرار دادن در كيسه، خنك كنيد.
28. براي تلقيح سطحي محيط كشت جامد، سطح پليت مربوطه را خشك كنيد. براي اين كار، درپوش پليت را برداشته و هر دو را بطور واژگون در داخل انكوباتور كه در دماي C ۫ 50 – 25 تنظيم شده، قرار دهيد تا قطرات آب از سطح محيط كشت ناپديد شود.
منبع (http://foodamir.blogfa.com/)